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友善列印Alpha 技術

Alpha 是由 Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay 這五個單字所組成的縮寫字,清楚點明了這個技術是由可引發冷光反應的相鄰近物質作為偵測原理,具有訊號放大、不需清洗分離步驟等特性。此技術是由分子偵測技術知名領導品牌 PerkinElmer 公司所開發,具有前所未有的應用彈性與操作簡易度,能夠取代步驟繁複的 Western Blot、ELISA、EMSA、ChIP、PCR 等類型產品,讓研究者能夠隨著不同階段的實驗需求,彈性應用在各種不同類型的實驗中,例如:偵測生物樣品中的 Biomarker 分子含量、偵測 Cell Lysates 中的磷酸化蛋白質含量或進行各種 Kinase Assay,其他如 Cell Signaling、Epigenetics、Protein:Protein 或 DNA:Protein Interaction 等研究領域皆可適用。相較於其他技術平台, Alpha 技術更加簡單易操作,使用者幾乎不需額外學習任何複雜的製備或標定技術,即可以輕鬆獨力完成偵測平台的設計與建立工作。

應用 Alpha 產品 (請點擊瀏覽詳細產品介紹)
Biomarker & Cytokine Detection
Histone Modification Assay
Kinase Assay
Phosphoprotein Detection
cAMP Detection
Protein:Protein / DNA:Protein Interaction
DNA Methylation Assay
Receptor-Ligand Binding Assay
Protease Assay
※備註:所有 Alpha 系列產品皆須搭配適合的微量多孔盤偵測設備使用。 (請點擊瀏覽相關產品介紹)

 

  • 技術原理
  • 產品特點
  • Alpha Toolbox & AlphaScreen Fusion Tag Detection Kit

Alpha 技術原理

Alpha 技術主要是由兩種核心物質所組成,一為 Donor Bead,另一為 Acceptor Bead。Donor Bead 帶有光敏感物質 "phthalocyanine",當以 680 nm 雷射光激發 Donor Bead 時,此光敏感物質可催化周遭的氧分子形成活化態,並於 200 nm 作用範圍內,進一步激發鄰近的 Acceptor Bead 產生化學冷光反應,此能量會轉移至 Acceptor Bead 本身所帶有的螢光物質,使其產生出螢光訊號。因此在分析反應中若 Donor Bead 所帶有的 A 分子與 Acceptor Bead 所帶有的 B 分子產生結合或具有交互作用時,Acceptor Bead 即會被帶至 Donor Bead 附近,於 680 nm 雷射光激發下即可測得 Acceptor Bead 所發出的螢光訊號。

 

Alpha 技術具有兩種 Acceptor Bead,分別為:

  1. AlphaScreen Acceptor Bead:螢光訊號波長為 520-620 nm;
  2. 新一代的 AlphaLISA Acceptor Bead:螢光訊號波長為 615 nm,相較於舊型的 AlphaScreen Acceptor Bead 具有訊號更強、以及訊號波長區間更集中的優點。

 

AlphaLISA Acceptor Bead emissions are narrower and brighter than AlphaScreen Acceptor Bead emissions. This allows the development of assays in complex samples such as serum and plasma. (AlphaLISA’s final emission is from europium (615 nm), and AlphaScreen’s final emission is from rubrene (520-620 nm).

Alpha 產品特點

  • 偵測靈敏度更高 — Alpha 技術中所使用的 Donor Bead 在 680 nm 雷射光激發下,每秒可催化產生約 60,000 個活化態氧分子,有效達到訊號放大效果,使得系統偵測靈敏度可達 attomole 等級。

  • 訊號背景值更低 — Alpha 技術中所使用的 Acceptor Bead,其所激發出的螢光訊號具有長達 0.3 秒的半衰期,因此可以時差性螢光 (Time-Resolved Fluorescence, TRF) 模式偵測訊號,有效降低偵測訊號中的背景值。

  • 偵測範圍更廣 — 由於 Donor Bead 與 Acceptor Bead 之間有效的作用距離長達 200 nm,因此無論是小分子 (如:cAMP、cGMP) 或是大分子 (如:Cytokine、Hormone、Kinase、Protein、Whole Cell…) 皆可以 Alpha 技術偵測,且其有效分析範圍 (dynamic range) 更可達 2.5 ~ 5 logs,明顯優於其他傳統分析系統 (如:ELISA, Western Blot)。

  • 節省樣品與實驗成本 — 可依據樣品取得的難易度,彈性選擇 96-, 384-, 1536-well format 進行實驗,不但可減少實驗試劑成本,更可避免珍貴樣品的浪費。

  • 可直接適用於複雜性樣品 — Alpha 技術可不經額外純化直接適用於複雜性樣品 (如:Cell Lysates、Cell Culture Medium、Serum、Plasma…),使實驗數據更能真實反應分子在活體內的狀態。

  • 隨取隨用,操作更簡便 — Alpha Beads 由於只有 250 nm 直徑大小,因此不像其他 Bead-based 分析平台 (如: Scintillation Proximity Assay, SPA Beads 2-10 µm; FMAT Beads 6-20 µm ) 有珠子容易沈澱的問題,不但可以隨取隨用 (Ready-To-Use, RTU),而且在使用自動化液體處理系統 (automatic liquid handling device) 分裝試劑時,也不會有阻塞分裝管線的疑慮。

  • 符合大量樣品分析時的自動化操作流程規範 — Alpha 技術實驗流程完全不需分離或洗滌步驟,全均質化 (homogeneous) 的實驗流程與簡單的操作步驟 (混和樣品與試劑 → 靜置 → 讀取訊號),使其非常適合應用於大量樣品的自動化分析 (high throughput screening)。

Alpha Toolbox & AlphaScreen Fusion Detection Kit

Alpha Toolbox 與 AlphaScreen Fusion Detection Kit 系列產品,可以讓研究者自由組合出多種偵測平台,以彈性符合多元化的實驗需求與生物樣品特性。應用實驗包含 Protein:Protein Interaction、DNA:Protein Interaction、DNA Methylation Assay,以及 Receptor-Ligand Binding Assay、Protease Assay、Phosphodiesterase Assay、Biomolecule Detection 等…。歡迎洽詢索取詳細技術資料。

Alpha Toolbox AlphaScreen Fusion Tag
Detection Kit
1

Alpha Donor Bead


AlphaLISA Accetor Bead

(註1)
Kit 中皆含有 AlphaScreen Streptavidin coated Donor Bead 與 AlphaScreen anti-tag antibody coated Acceptor Bead。
(註2) 可作為 Alpha 實驗中的 Positive control 使用。

 

AlphaScreen Acceptor Bead

 
 

特殊應用範例:

Simultaneous Measurement of Protein Interactions and Phosphorylation — MAP kinase ERK2 dissociation from MAP2K MEK1 upon phosphorylation
Assay Type
AlphaScreen and AlphaLISA in a single well with recombinant proteins PerkinElmer Products Used
  • Alpha Donor Beads (GSH-conjugated)
  • AlphaScreen Acceptor Beads (Anti-mouse IgG)
  • AlphaLISA Acceptor Beads (nickel chelate-conjugated)
  • EnVision Multilabel Plate Reader
  Results
This assay fuses the versatility of AlphaScreen and AlphaLISA platforms. In its unphosphorylated state, GST-ERK2 binds His-MEK1. In the presence of ATP, MEK1 phosphorylates ERK2, causing both proteins to dissociate. Phosphorylation-interaction patterns generated are characteristic for each enzymesubstrate pair and were used to compare mechanisms of action and selectivity of phosphatases as well as small-molecule kinase inhibitors, allowing to discriminate between an ATP-competitor and an allosteric modulator.
 

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Alpha Donor Bead
AlphaLISA Acceptor Bead
AlphaScreen Acceptor Bead
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