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AlphaLISA Epigenetics Reagents
AlphaLISA Epigenetics Reagents 是由 Alpha 技術所延伸出來的便利產品,可適用於偵測 Peptide 或 Full-length 型式的 Histone 蛋白。具有高度專一性,可藉由偵測各種後轉譯修飾類型的 Histone 蛋白,精確定量組蛋白密碼 (histone code) 調控者 (例如 Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase) 的酵素活性。與 ELISA 產品相比,AlphaLISA 偵測試劑具有更加寬廣的偵測區間,可減少樣本稀釋比例的測試步驟;並且具有更精簡快速的實驗流程,讓研究者能夠更快取得定量結果。
作用原理:
AlphaLISA 偵測技術是由兩種核心物質所組成,一為 Donor bead,另一為 Acceptor bead。Donor bead 本身身帶有光敏感物質 "Phthalocyanine",因此當以 680 nm 雷射光激發 Donor bead 時,此光敏感物質可催化周遭的氧分子形成活化態,並於作用範圍內激發鄰近的 Acceptor bead 產生化學冷光反應,此冷光能量會進一步轉移至 Acceptor bead 本身所帶有的螢光物質,使其最終產生 615 nm 螢光訊號。與其他偵測平台相比 (例如 FRET、TR-FRET),AlphaLISA 技術的能量轉移有效距離長達 200 nm,因此不論是胜肽、重組蛋白、或是細胞內原始含有的蛋白質,皆可作為實驗偵測對象。具有專一性佳、靈敏度高、偵測區間廣泛以及流程簡單等多項優質特點。
在進行實驗時,研究者僅需自行準備 (1). 待測酵素與輔因子 (cofactor)、(2). 鍵結有 Biotin 的 Histone peptide substrate (或 Histone 全長蛋白),即可開始進行實驗。此兩項所需試劑在產品應用文件中皆有詳盡的建議資訊,因此研究者可安心參照選購。
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Excellent Specificity!左圖為 AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads 的專一性測試結果。實驗證實此試劑的確能夠專一性地辨識偵測 H3K9me2 biotinylated peptide,並且無論是 H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptides、unmodified H3 peptides,皆無法干擾反應產生偽陽性結果。 |
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Well Validated!所有 Alpha 系列的 Histone modification 偵測試劑,皆實際使用特定酵素進行完整測試,具有詳盡的測試條件與實驗流程可供參照。例如左圖即是使用 G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase 所進行的酵素用量和時間反應測試結果,受測產品為 Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同時搭配 Alpha Streptavidin Donor beads 等產品使用)。其他測試項目包含:Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination. |
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訂購資訊
目前 Revvity 公司已針對 Histone H3 以及 p53 蛋白質的 Methyl 與 Acetyl 後轉譯修飾,推出多款 AlphaLISA 專一性偵測產品。由於產品品項新增快速,詳細產品應用與訂購資訊,歡迎洽詢伯森各區域業務專員。
Methyl Modifications |
Mark Detected |
AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads |
Assay Points |
Cat. No. |
H3K4 Unmodified |
500 |
PK-AL119C
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10,000 |
PK-AL119M |
50,000 |
PK-AL119R |
H3K4me1-2 |
500 |
PK-AL116C |
10,000 |
PK-AL116M |
50,000 |
PK-AL116R |
H3K9me2 |
500 |
PK-AL117C |
10,000 |
PK-AL117M |
50,000 |
PK-AL117R |
H3K27me2-1 |
500 |
PK-AL121C |
10,000 |
PK-AL121M |
50,000 |
PK-AL121R |
H3K27me3 |
500 |
PK-AL122C |
10,000 |
PK-AL122M |
50,000 |
PK-AL122R |
H3K36me2 |
500 |
PK-AL123C |
10,000 |
PK-AL123M |
50,000 |
PK-AL123R |
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Acetyl Modifications |
Mark Detected |
AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads |
Assay Points |
Cat. No. |
H3K4 Unmodified |
500 |
PK-AL119C
|
10,000 |
PK-AL119M |
50,000 |
PK-AL119R |
H3K9ac |
500 |
PK-AL114C |
10,000 |
PK-AL114M |
50,000 |
PK-AL114R |
H3K27ac |
500 |
PK-AL120C |
10,000 |
PK-AL120M |
50,000 |
PK-AL120R |
p53 K382ac |
500 |
PK-AL124C |
10,000 |
PK-AL124M |
50,000 |
PK-AL124R |
備註:(1). 每個 Assay Point 是指使用 384-well 多孔盤,每個 well 內含有 25 µl 反應體積為計算。 (2). AlphaLISA 系列產品皆屬於偵測試劑,並無提供 enzyme 與 substrate,若為原廠測試過品項,可提供您相關材料來源作為參考。 |
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Additional Items Required for AlphaLISA histone modification assays |
Product |
Assay Points |
Cat. No. |
AlphaScreen Streptavidin Donor beads |
2,000
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PK-6760002S
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10,000 |
PK-6760002 |
100,000 |
PK-6760002B |
AlphaLISA biotin-anti-histone H3 (C-ter) antibody
(required for full-length Histone substrates) |
500 |
PK-AL118C |
10,000 |
PK-AL118M |
50,000 |
PK-AL118R |
AlphaLISA 5X Epigenetics Buffer 1 kit
(required for Histone H3-derived peptidic substrates) |
10 ml |
PK-AL008C |
100 ml |
PK-AL008F |
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