Morpholino 反義核酸合成服務
過去在使用反義 (antisense) 抑制實驗來探討基因功能時，常因為反義核酸的不穩定、專一性差或效率低等問題，而造成實驗的限制。美國 Gene Tools 公司獨家推出的「Morpholino Oligo」將可解決這些困擾研究人員已久的缺陷，讓您的實驗更加簡便而精確。歡迎與我們聯繫索取服務詳情。
關於 Morpholino
Morpholino oligo 是將 6 碳環之 Morpholine 接上鹼基後，以非離子性的 phosphorodiamidate 連接而成（如下圖所示）。相較於過去在反義抑制實驗中常用的 Phosphorothioate 及 PNA，Morpholino 能有更好之效率及專一性、較簡便的使用方式，而較為便宜。
Morpholino Oligos 特點
- 穩定性高：具核酸水解酵素 (nuclease) 抵抗性，可穩定存留於細胞內較長的時間，並避免產生出具毒性的裂解物質。
- 效率高：即使作用濃度僅有 nanoMolar，也能有優越的抑制效果。
- 不須 RNase H：可避免 RNase H 對與目標 RNA 相似的非目標 RNA 產生裂解作用。
- 序列專一性高：其專一性為 Phosphorothioate 的 100 倍，即使在高濃度狀況 下使用也不會降低其專一性。
- 對目標 RNA 結合能力好：可侵入目標 RNA 的二級結構，達到穩定結合的目的。
- 在細胞質及細胞核內皆有活性：可增加 Morpholino oligo 作用的機會。
- 在無細胞系統及細胞內皆適用：Morpholino oligo 在有、無細胞之系統下，皆有良好之反義活性。
- 不受血清影響：不會與血清中之白蛋白 (albumin) 結合而降低其活性。
- 溶解度好：溶解度可高達 100 mg/ml，且在保存過程中不易有沉澱發生。
- Oligo 長度最長：最長可提供至 25 mer 的 Morpholino oligo（為目前市售最長的）。即使長度增加至 25 mer，仍能保有高專一性。
- 快速簡單的遞送方式：針對貼附型細胞可透過簡單的刮細胞方式 (Scrape Delivery) 將 Morpholino oligo 運送入細胞中作用，避免使用 Liposome 所造成的細胞毒性，遞送效率高（可高達 85~90%）。
- 經濟實惠：價格較一般反義核酸便宜。
Morpholino 與 siRNA 比較表
| Morpholino | siRNA | |
|---|---|---|
| Allows you to modify splicing | ✓ | ✓ |
| Effective & specific in embryos | ✓ | |
| Free of off-target effects | ✓ | |
| Free of interferon effects | ✓ | |
| Typical first-try targeting success | ✓ | |
| Functions in both cytosol & nucleus | ✓ | |
| Complete stability & long-term efficacy | ✓ | |
| Well understood mechanism | ✓ |
如何挑選 Morpholino Antisense Oligos 的作用區域
- 針對 post-spliced mRNA 上，由 5'-cap 到轉譯起始點 3' 端 25 個 bases 左右的這一段區域為最佳設計區段。
- Morpholino oligo 的 self-complementarity 部分不可超過 4 個 bases。
- Morpholino oligo 的 G 含量最好不要超過 36%，因為會降低 oligo 的溶解度。
- Morpholino oligo 的長度越長越好（最長 25 個 mer），然而 Morpholino oligo 的價格並非以長度來計算，因此同濃度情況下，25 mer 的 Morpholino oligo 不會比 18 mer 的 Morpholino oligo 來得昂貴。
Morpholino Antisense Oligo 的運送
在細胞實驗方面可藉由電穿孔 (electrophoration) 或使用 Gene Tools 公司所開發的專利「Endo-Porter」試劑將 Morpholino oligo 送入細胞中作用；貼附型細胞還可簡單利用刮細胞的方式將 Morpholino oligo 送入細胞中，歡迎與我們聯繫索取詳細實驗流程。
在動物實驗方面 Gene Tools 公司最新研發的「Vivo-Morpholinos」是在一般 Morpholino oligo 序列 3' 端連結了由八個 Arginine 胺基酸結構中的帶正電基團 "Guanidium Group" 所組成的支鏈，此支鏈可協助 Morpholino oligo 以內吞作用 (endocytosis) 進入動物細胞中。目前已有多個小鼠及狗的成功案例顯示，藉由簡單的靜脈或腹腔注射方式即可讓 Vivo-Morpholinos 於動物體內發揮有效作用，且數據顯示 Vivo-Morpholinos 毒性極低非常適合動物實驗使用。歡迎與我們聯繫索取詳細產品使用方式。
